虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析
文献类型: 中文期刊
第一作者: 任广明
作者: 任广明;林玉杰;徐黎明;赵景壮;邵轶智;卢彤岩
作者机构:
关键词: 虹鳟;fabp10;真核表达载体;脂质代谢
期刊名称: 水产学杂志
ISSN: 1005-3832
年卷期: 2023 年 001 期
页码: 1-7
收录情况: 北大核心
摘要: 为探究虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脂肪酸结合蛋白10(fatty acid binding protein 10,fabp10)基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等,本试验根据Gen Bank数据库公布的河鳟(Salmo trutta)fabp10基因的CDS序列信息设计引物,通过RT-PCR获得fabp10基因片段,将目的片段与p MD-18-T载体连接转化DH5α感受态细胞,构建p MD-18-T-fabp10克隆载体,双酶切回收基因片段,构建pc DNA3.1-fabp10真核表达载体,分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达,经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至EPC细胞,分别于24h、36 h、48 h后收集细胞进行荧光定量PCR检测。结果显示:虹鳟fabp10基因CDS区与Gen Bank数据库中Salmo trutta fabp10基因CDS区同源性高达100%。生物信息学分析发现,fabp10基因编码区全长378 bp,编码126个氨基酸。Fabp10蛋白主要分布在细胞质中,存在23个潜在磷酸化位点。转染pc DNA3.1-fabp10可显著提高EPC细胞中fabp10 m RNA的表达(P<0.05)。RT-q PCR结果显示:fabp10基因在肝脏中表达丰度最高,随之为肾脏、肌肉、肠、脾脏、心脏,在脑中表达量最低。本试验成功扩增出fabp10基因CDS区并构建了真核表达载体,成功预测分析了其结构和功能,为研究虹鳟机体脂质代谢过程提供了基础。
分类号: S917.4
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