基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴国华

作者： 吴国华;郑亚东;贾万忠;张少华;景志忠;骆学农;刘石泉;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴;18;ku蛋白;大肠杆菌;表达;重组蛋白ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2009 年 40 卷 12 期

页码： 1788-1793

收录情况： CSCD

摘要： 利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接后测序分析.将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21 (DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物.表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法.结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别.经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%.与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断.

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