牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王雪枝

作者： 王雪枝;朱远茂;史鸿飞;严昊;蔡红;王姝;马磊;薛飞

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E0蛋白;家兔;多克隆抗体;RT-PCR;Western-blot;IFA

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2014 年 05 期

页码： 4-8+207

收录情况： 北大核心

摘要： 为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。

分类号： S852.653

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