不同来源β-酪蛋白基因启动子调控人IFNα-2b基因的表达效率

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李辉

作者： 李辉;刘庆友;石德顺

作者机构：

关键词： 启动子;娟姗牛;干扰素α-2b;Bcap-37;转基因

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2016 年 49 卷 05 期

页码： 970-978

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为获得高启动效率的乳腺特异启动子,对荷斯坦奶牛、娟姗牛和奶水牛的β-酪蛋白基因启动子进行比较研究。【方法】对Genbank中所收录的荷斯坦奶牛、娟姗牛和水牛β-酪蛋白基因启动子序列进行比对分析,按照保守序列分别设计启动子区和3′端ploy A序列引物,同时设计人IFNα-2b基因和EGFP-Neo筛选序列引物并引入预先设计的酶切位点以方便载体构建。采集静脉血液,提取基因组DNA。PCR克隆β-酪蛋白基因启动子区和3′端ploy A区,同时以实验室保存质粒为模板克隆人IFNα-2b基因和EGFP-Neo筛选序列。测序正确后,将各片段按设计顺序依次插入p MD18-T骨架中,构建成p HSTBCNp-IFN,p JSBCNp-IFN和p SNBCNp-IFN乳腺特异表达载体。将各载体转染Bcap-37细胞,经G418筛选出稳定整合的转基因细胞系。用胰岛素(1 mg·L-1),转铁蛋白因子(1 mg·L-1),氢化可的松(1 mg·L-1)和PRL(250IU·L-1)联合对转基因细胞系进行诱导,然后用PCR、Western blotting、QRT-PCR技术和ELISA方法分别在m RNA水平和蛋白质水平检测IFNα-2b的表达。【结果】PCR后获得了荷斯坦奶牛、娟姗牛和水牛β-酪蛋白基因启动子区,长度分别为5 219、5 244和5 216 bp,其中包括了第一外显子,第一内含子和部分第二外显子,部分第二外显子的51个碱基编码17个氨基酸的信号肽序列。克隆了1 166 bp的ploy A区序列。最终将构建的3个乳腺特异表达载体转染Bcap-37细胞并经过G418筛选后,获得了3个转基因细胞系。经激素诱导后,PCR、Western blotting、QRT-PCR和ELISA检测发现3个转基因细胞系都表达了IFNα-2b基因,并且发现娟姗牛β-酪蛋白基因启动子在调控IFNα-2b基因的表达上效率较高,在m RNA水平和蛋白质水平上显著高于其他两个启动子(P<0.05)。【结论】娟姗牛β-酪蛋白基因启动子在调控外源基因表达上具有较高的效率,是具有应用前景的乳腺特异性启动子。所构建的表达载体为IFNα-2b转基因动物乳腺生物反应器的制备奠定基础。

分类号： S823

  • 相关文献

[1]水稻OsTFL2基因启动子的克隆及功能验证. 陈立,张晓东,王心怡,韦清源,李虎,綦熿松,刘芳,关和新,邱永福. 2019

[2]甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因启动子遗传转化烟草的研究. 高玉娜,林荣华,周平,叶冰莹,陈由强,陈如凯. 2010

[3]Amy32B启动子在水稻中的表达分析. 余木兰,唐宁,夏玉梅,卜小兰,詹祎捷,淡俊豪,石跃斌,曹孟良. 2020

[4]橡胶树HbFCA启动子的克隆及其在橡胶树中的表达分析. 华玉伟,孙芳,黄天带,蔡海滨,杨加伟,黄华孙. 2013

[5]紫花苜蓿高温诱导启动子pMsMBF1c的克隆与功能分析. 李小冬,莫本田,牟琼,娄芬,陈文贵,陈光吉,张瑜,韩永芬. 2019

[6]家蚕转基因研究进展. 陈金娥,翁宏飚,孟智启. 2008

[7]鸡腿菇gpd启动子的克隆及序列分析. 彭卫红. 2011

[8]马铃薯prp1-1启动子的克隆及转基因研究. 马志刚,鄢波,王玲仙,黄兴奇,万萌,郑丽屏. 2002

[9]斑马鱼Mylz2启动子的克隆与转绿色荧光蛋白基因鱼的构建. 简清,白俊杰,叶星,夏仕玲,梁旭方,罗建仁. 2004

[10]HuIFNα-2b在酿酒酵母中分泌表达的研究. 陈海宁,蒲广西,周鹏,曾召绵,夏勇,梁国栋. 2004

[11]VE对4℃保存娟珊牛精液品质的影响. 陈晓英,赵丽,马金英,旦增洛桑. 2017

[12]提高高海拔地区娟姗牛犊牛成活率的主要措施. 马金英,赵丽,李海艳,栗朝亮,洛桑旦增. 2016

[13]娟珊牛与牦牛杂交后代泌乳量和乳品质分析. 吴晓云,刘东花,梁春年,郭宪,马晓明,褚敏,阎萍. 2023

[14]尼龙袋法比较水牛与娟姗牛对象草消化能力的差异. 张勤,李丽莉,韦升菊,黄春花,梁辛,邹彩霞,唐庆凤,彭开屏,杨膺白. 2016

[15]娟姗牛——我国奶业生产重要的品种遗传资源. 张明军,郝海生,朱化彬,杜卫华,王栋. 2008

[16]水牛与娟姗牛对不同粗饲料体外消化能力的比较研究. 张勤,李丽莉,韦升菊,梁辛,邹彩霞. 2016

[17]娟姗牛杂交改良西藏本地黄牛的效果调查. 王莉,旦增洛桑,马金英,黄丰立,奥斯曼,宋天增. 2015

[18]西藏地区娟姗牛扩繁的要点分析——评《奶牛高效繁殖原理及调控技术》. 索朗曲吉. 2023

[19]不同品种水牛乳中矿物元素的测定与分析. 林波,黎颖,李玲,杜寒春,唐艳,农皓如,曾庆坤. 2014

[20]甘南牦牛杂交后代生长发育分析. 石红梅,李鹏霞,丁考仁青,才让闹日,薛瑞林,徐海,万玛吉,尕旦吉,马桂琳,阎萍,郭宪. 2022

作者其他论文 更多>>

微信小程序