口疮病毒dUTPase基因的原核表达及亚细胞定位

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘伟

作者： 刘伟;杨侃侃;殷冬冬;王元红;俞赵荣;蒋书东;李传峰;李永东;王勇

作者机构：

关键词： 口疮病毒;dUTPase基因;原核表达;亚细胞定位

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2018 年 07 期

页码： 818-823

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了对口疮病毒(orf virus,ORFV)的dUTPase基因进行原核表达和亚细胞定位研究,本研究利用PCR扩增获得dUTPase基因,通过亚克隆获得重组表达质粒p ET-32a-dUTPase和p EGFP-C3-dUTPase。p ET-32a-dUTPase经IPTG诱导表达出dUTPase蛋白。蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价。p EGFP-C3-dUTPase转染BHK21细胞,利用荧光显微镜观察dUTPase蛋白的亚细胞定位。结果表明,dUTPase蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,分子质量大小约为35.7 ku,与预期相符。表达的dUTPase His融合蛋白能够与His标签的单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性。琼脂扩散试验结果显示抗体效价为1∶8。真核表达的dUTPase蛋白在转染的BHK21细胞中主要分布在细胞质中。本研究结果为进一步研究dUTPase蛋白的功能奠定了一定的理论基础。

分类号： S852.65

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