高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨欢

作者： 杨欢;曹赵云;马有宁;陈铭学

作者机构：

关键词： 液相色谱-串联质谱;特异性肽段;稳定同位素标记肽段;酶解条件;过敏蛋白质;稻米

期刊名称： 色谱

ISSN： 1000-8713

年卷期： 2021 年 012 期

页码： 1314-1323

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶（Lys-C）和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱（NanoLC-LTQ-Orbitrap）采集和Protein Discovery软件鉴定,NCBI和Uniprot数据库的基本局部搜索比对工具（BLAST）筛选验证,最终获得表征稻米及制品中α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂类蛋白质（seed allergenic protein RAG2, RAG2）、乙二醛酶Ⅰ活性蛋白（glyoxalaseⅠ）和α-球蛋白（19 kDa globulin）3种过敏蛋白质的特异性肽段。3个特异性肽段经液相色谱梯度洗脱,在Poroshell色谱柱上实现完全分离,由三重四极杆质谱仪分析。实验通过优化多反应监测（MRM）质谱参数,比较不同溶剂体系、水解酶种类和酶量等酶解条件,结合内标法定量,实现对稻米及制品中3种蛋白质的绝对定量。实验结果表明,当酶解溶剂中含1 g/L十二烷基硫酸钠,采用Lys-C和胰蛋白酶组合消化策略,可有效提高3种蛋白质的酶切效率至65.7%～97.3%。该方法在1～200 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.997 2, 3种蛋白质的检出限和定量限分别为3 mg/kg和10 mg/kg。3种蛋白质在空白稻米制品基质中3个水平下的加标回收率为80.6%～103.7%,日间和日内精密度均小于11.5%。该方法稳定性好,检测灵敏度高,操作简便,在分析各类稻米及制品中3种过敏蛋白质含量具有广泛的应用前景。

分类号： O657.63%TS210.7

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