鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 白龙

作者： 白龙;邵毅;黄柳娟;冯博;周昌艳;索玉娟;白亚龙;林淼

作者机构：

关键词： 鸡源细菌;四环素耐药基因;多重聚合酶链式反应;快速检测

期刊名称： 食品与机械

ISSN： 1003-5788

年卷期： 2018 年 10 期

页码： 55-59+90

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因。与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广。

分类号： TS207.5

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