枯草芽孢杆菌CAS15嗜铁素基因dhbC的克隆、表达及功能鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 余贤美

作者： 余贤美;林超;郑服丛;贺春萍;张修国

作者机构：

关键词： 枯草芽孢杆菌;dhbC基因;基因克隆;序列分析;原核表达;基因敲除

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 06 期

页码： 26-32

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过PCR技术扩增得到dhbC基因,对其进行序列分析发现,dhbC基因片段长为1197bp,预期编码398个氨基酸,蛋白分子量大小为43.8kD。将目的片段连接到表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET-30a-dhbC,以IPTG在30oC诱导4h实现高效表达,获得一个分子量为48.8kD的融合蛋白。重组蛋白可溶性分析结果表明:融合蛋白主要为可溶性蛋白。Western blotting分析结果表明:重组蛋白可与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应,在48.8kD处有特异条带,与预期结果一致,证明重组质粒中含有dhbC基因。通过同源重组的策略将dhbC基因敲除后重新导入,验证了dhbC基因与嗜铁素的生物合成密切相关。

分类号： Q78

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