猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴锦艳

作者： 吴锦艳;田宏;陈妍;尚佑军;刘湘涛

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;NSP9基因;绿色荧光蛋白;融合表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2012 年 08 期

页码： 843-847

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染Marc145细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和NSP9基因转录水平。结果显示,经双酶切及PCR鉴定,目的基因的大小与预期相符。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有NSP9基因的转录。本研究成功构建的猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因GFP融合表达质粒,为在细胞水平快速筛选有效的siRNAs提供了工具。

分类号： S852.651

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