N-豆蔻酰基转移酶在大肠埃希氏菌中的表达、纯化及活性检测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王苗苗

作者： 王苗苗;董虎;卢渊录;郭慧琛;孙世琪;闻晓波

作者机构：

关键词： N-豆蔻酰基转移酶;豆蔻酰化;原核表达;蛋白纯化

期刊名称： 动物医学进展

ISSN：

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为表达具有活性的N-豆蔻酰基转移酶（N-myristoyltransferase, NMT）,用于口蹄疫病毒样颗粒组装效率的优化,将hNMT1基因克隆至pRSFDuet1表达载体,将其转化至大肠埃希氏菌BL21-CodenPlus（DE3）-RIL中,经IPTG诱导,并对诱导前细菌浓度、诱导剂浓度、诱导温度进行优化。目标蛋白经Ni2+亲和层析纯化后进行免疫印迹验证,荧光法测定其活性。结果显示,成功表达出hNMT1,在OD 600 nm值为1.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、表达温度为16℃时,hNMT1蛋白可溶性表达量最高,镍柱纯化后蛋白与抗His标签单克隆抗体在46 ku处特异性结合,与预测大小一致。确定了hNMT1表达的最适条件并成功制备出具有催化豆蔻酰化活性的hNMT1,为研究豆蔻酰化修饰对小RNA病毒蛋白衣壳装配的影响奠定了基础。

分类号： S852.61

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