短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因(chiD)的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄丹丹

作者： 黄丹丹;车建美;刘波;陈庆河

作者机构：

关键词： 短短芽胞杆菌;几丁质酶基因;克隆;表达;IPTG诱导

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2014 年 35 卷 09 期

页码： 101-107

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5ɑ并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1 524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶。将重组质粒pMD18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-chiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明:重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致。为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8 h、0.5 mmol/L和28℃。这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础。

分类号： R378

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