诱导表达猪生长激素pGH载体系统构建及其在PK15细胞中表达验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 白立景

作者： 白立景;周荣;敖红;鞠辉明;王楚端;李奎

作者机构：

关键词： 猪生长激素(pGH);四环素(TET-ON);诱导表达

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2013 年 21 卷 004 期

页码： 483-488

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为实现外源生长激素(GH)基因在特定时间、空间的可控表达,本研究构建四环素(TET-ON)表达载体系统,并在细胞水平对该载体系统进行诱导活性验证.结果表明:(1)成功构建了重组载体pTRE-GH12;(2)筛选建立了可诱导表达GH的细胞系;(3)利用强力霉素(doxycycline,DOX)诱导阳性细胞克隆并检测外源GH的表达,QRT-PCR结果表明,实验组细胞在DOX诱导后表达活性是诱导前264.481倍;对照组细胞在DOX诱导前诱导后表达无明显变化,实验组和对照组细胞间差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后差异极显著(P<0.01);(4)Western杂交后灰度分析结果和QRT-PCR趋势一致,实验组和对照组细胞间GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01),实验组DOX诱导前后GH蛋白表达量差异极显著(P<0.01).研究结果提示,四环素(TET-ON)诱导猪生长激素(GH)表达系统实现了可控表达,为以后制备可诱导表达GH的转基因动物提供了技术基础.

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