猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达条件优化及多抗制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 宋军科

作者： 宋军科;于三科;骆学农;窦永喜;林青;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴;半胱氨酸蛋白酶;原核表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2012 年 32 卷 12 期

页码： 1837-1841

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1的蛋白生物学特性,为半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用研究奠定基础。将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转化入大肠杆菌BL21,进行诱导表达并对表达条件进行优化,应用免疫印迹法(Western blot)和动物试验进行重组蛋白的抗原性分析。经SDS—PAGE分析,表达的TsCL-1重组蛋白相对分子质量为61 000,与推导结果一致。使用2×YT培养基于28℃、IPTG终浓度为0.1 mmol/L的条件下诱导10 h,可溶性重组蛋白表达量最高。Western blot检测结果表明,TsCL-1蛋白能与猪囊尾蚴多克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测血清抗体结果表明:制备的抗体能与TsCL-1重组蛋白特异性结合。成功诱导表达出了TsCL-1重组蛋白,表达产物的特异性、敏感性及稳定性良好。对猪囊尾蚴病的诊断及抗寄生虫新药物和疫苗研发提供了一定的理论依据。

分类号： S852.73

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