蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张涛

作者： 张涛;罗维玉;姜水涛;朱鹏阳;李呈军;陈化兰;孙晓林;姜丽

作者机构：

关键词： PKR;原核表达;蛋白纯化;多克隆抗体

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2016 年 51 卷 01 期

页码： 7-12

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达GST-PKR融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白获得稳定表达.表达产物经Glutathione-sepharose 4B亲和层析初步纯化后,用凝血酶切除GST标签,而后经离子交换层析及分子筛在AKTA Explorer上进一步纯化,得到高纯度无标签的PKR蛋白.以纯化后的PKR蛋白为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,斑点杂交试验检测其效价达到1∶50 000以上,Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明制备的多抗与PKR蛋白的反应具有高度特异性.【结论】PKR蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多克隆抗体可用于PKR蛋白的检测,从而为研究PKR在病毒感染过程中的作用提供了重要的工具.

分类号： S852.23

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