两种葡萄溃疡病菌双重PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张玮

作者： 张玮;李兴红;郭飞飞;刘梅;黄金宝;燕继晔

作者机构：

关键词： 葡萄;葡萄座腔菌;小新壳梭孢;双重PCR检测

期刊名称： 植物保护学报

ISSN： 0577-7518

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 636-642

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为快速准确地鉴定出2种不同的葡萄溃疡病菌——葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea和小新壳梭孢Neofusicoccum parvum,根据Gen Bank中已报道的引起我国葡萄溃疡病的6个主要种的延伸因子-1序列及β-微管蛋白序列分别设计了葡萄座腔菌和小新壳梭孢的特异性引物B.d-F/B.d-R及N.p-F/N.p-R,建立了双重PCR检测方法,并对田间病样进行检测。结果表明,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R可以分别在葡萄座腔菌和小新壳梭孢中扩增到324 bp和212 bp的特异性条带,检测灵敏度均为10 pg。双重PCR检测体系中Taq DNA聚合酶的最佳用量为0.05 U/μL,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R的最佳终浓度均为0.2μmol/L,最适退火温度和退火时间分别为58℃和30 s。对田间葡萄病样的检测结果与室内病样常规病原菌分离结果一致。表明该双重PCR检测方法能够同时检测葡萄座腔菌和小新壳梭孢,有助于快速、灵敏地检测葡萄苗木的带菌情况。

分类号： S436.631.1

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