逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴锦艳

作者： 吴锦艳;田宏;郑海学;陈妍;靳野;尚佑军;刘湘涛

作者机构：

关键词： T7RNA聚合酶基因;逆转录病毒载体;PK15细胞;SK6细胞;稳定表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2011 年 42 卷 04 期

页码： 527-532

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的T7RNAP蛋白具有良好的反应原性。本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。

分类号： Q786`S852.65

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