康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅡ基因与乳酸菌非抗性穿梭表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘燕

作者： 刘燕;张宏福;孙哲;杨琳;王瑞军

作者机构：

关键词： 纤维素酶;CBHⅡ基因;大肠杆菌;表达

期刊名称： 饲料工业

ISSN： 1001-991X

年卷期： 2017 年 14 期

页码： 47-51

收录情况： 北大核心

摘要： 以康宁木霉AS3.2774 m RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增了1 413 bp的CBHⅡ全长基因,利用T-A克隆,将CBHⅡ克隆至克隆载体p MD18-T Simple Vector,构建质粒p MD18-T-CBHⅡ。以Sma I和Sph I双酶切p MD18-T-CBHⅡ和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thy A)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体p W425t,将纯化的CBHⅡ亚克隆到p W425t中,得到原核表达重组质粒p W425t-CBHⅡ,可在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达。将p W425t-CBHⅡ转化在thy A基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定、分析测序以及生长功能弥补筛选阳性克隆。SDS-PAGE分析,约49.6 k D的蛋白可见,刚果红染色显示重组大肠杆菌可产生明显的水解圈,并用p NPC法测得重组大肠杆菌的CBHⅡ酶活力在温度50℃、p H值5.0时达到最大。

分类号： Q55`Q78

  • 相关文献

[1]酸性纤维素酶CBHⅡ基因与非抗性穿梭表达载体的重组及在乳酸杆菌的表达及其活性检测. 赵莹,孙哲,刘燕,胡后银,陈大芳,娄玉杰,张宏福. 2009

[2]绿色木霉纤维二糖水解酶基因的克隆及其在乳酸菌中的表达与鉴定. 王翠艳,王玉华,朴春红,刘俊梅,胡耀辉,任大勇,于寒松. 2016

[3]厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的直接表达及活性筛选. 陈燕,黄金群,裴建新,庞浩. 2013

[4]产纤维素酶大肠杆菌工程菌的构建和酶的表达. 芦志龙,吴仁智,陈英,黄俊,陆琦,陈东. 2019

[5]苍白杆菌SY286菌株纤维素酶基因的克隆与表达. 臧超群,白元俊,宋飞,谢瑾卉,林英,梁春浩. 2018

[6]日本脑炎病毒NSl基因在大肠杆菌中的高效表达. 金吉东,仇华吉,田志军,周艳君,张守发,童光志. 2003

[7]奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建. 王林锋,杨宏军,杨少华,王长法,高运东,钟跻峰,葛利江. 2009

[8]大肠杆菌中利用苏云金芽胞杆菌强启动子p1Ac指导Cry1Ac蛋白表达的特性分析. 束长龙,刘东明,张杰,宋福平,黄大昉. 2011

[9]热纤维素梭菌内切葡聚糖苷酶基因在枯草芽孢杆菌的表达. 楚敏,杨红梅,王芸,娄恺. 2008

[10]纳豆激酶的克隆及在大肠杆菌中的表达. 李敏,陈柳萌,张诚,曾小军,刘芬,陈时建,李文婧,罗武. 2012

[11]基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立. 吴国华,郑亚东,贾万忠,张少华,景志忠,骆学农,刘石泉,才学鹏. 2009

[12]牙鲆抗菌肽HEPCIDIN基因在大肠杆菌中的融合表达. 李伟,陈松林. 2007

[13]含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究. 冯蕾,古丽努尔,杨新平. 2005

[14]在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白. 郭军庆,金宁一,毛春生,郭志儒,尹凤阁,殷震. 1999

[15]猪肥胖基因在大肠杆菌中的高效融合表达. 昔奋攻,李宁,戴茹娟,刘兆良,吴常信. 2001

[16]WSSV-VP37小肽在大肠杆菌中的偏爱型表达. 仇知光,刘庆慧,黄倢. 2011

[17]大豆24 kDa油体蛋白基因在大肠杆菌中的表达. 徐妙云,刘德虎,李刚强. 2005

[18]猪带绦虫45W-4B全长基因和剪切基因的原核表达与鉴定(英文). 余招锋,于三科,才学鹏,张志芳,景志忠,贾万忠. 2004

[19]牛流行热病毒G_1抗原表位基因在大肠杆菌中的表达、纯化及抗原性鉴定. 郑福英,蔺国珍,邱昌庆. 2007

[20]大肠杆菌植酸酶appA基因的克隆、表达及性质分析. 冉瑞法,刘淑娟,肖圣燕,冯蔚,李镇刚. 2017

作者其他论文 更多>>

微信小程序