牛sox2基因的克隆及重组反转录病毒载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 辛晓玲

作者： 辛晓玲;吕长荣;陈冬梅;窦忠英

作者机构：

关键词： 牛;sox2基因;iPS细胞;反转录病毒载体

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 10 期

页码： 1464-1469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建包含牛sox2基因编码序列的重组反转录病毒载体,获得有感染性的病毒颗粒,本研究以胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR方法克隆出牛sox2基因的开放阅读框序列,将其亚克隆至pMD18-T载体并测序。结果表明获得的基因片段与发表的牛sox2基因序列(Gen Bank Accession No.NM-001105463)高度同源;将测序正确的重组T载体用EcoRI和BglII酶切,基因片段插入反转录病毒载体pMSCVneo的相同酶切位点,成功构建了重组反转录病毒载体pMSCV-sox2。采用脂质体法用pMSCV-sox2转染包装细胞PT67,同时用pMIG(含绿色荧光蛋白)作为阳性对照,经流式细胞仪测定,该载体转染效率达到68.3%;转染后PT67细胞经G418筛选得到稳定的产毒细胞株,其病毒滴度达8.16×107CFU/mL,为下一步特定因子诱导牛体细胞转变为牛iPS细胞的研究奠定了基础。

分类号： S823`Q78

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