基于CRISPR/Cas9技术建立IGF2R基因修饰PK-15细胞

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢春嫡

作者： 谢春嫡;郭肖蓉;张煦栋;周荣;李奎

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;IGF2R基因;猪;品种改良

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 200-207

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 作为我国特色的地方种质资源，藏猪对高海拔、低氧、强紫外线辐射等恶劣环境具有良好的适应性，前期研究发现藏猪的IGF2R（insulin-like growth factor 2 receptor,IGF2R）基因在其内含子上有1段274 bp的缺失，且该缺失为藏猪独有的变异，关于IGF2R是否参与藏猪对低氧等恶劣环境的适应性调节的相关研究尚未报道。为了建立IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系，研究IGF2R基因对藏猪低氧耐受特性的影响，通过CRISPR/Cas9技术建立基因修饰PK-15细胞系，并通过PCR、实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR,RT-qPCR）、蛋白免疫印迹（Western-blot）、免疫荧光（immunofluorescence,IF）等方法鉴定其分子特征，随后分别利用CCK-8和RT-qPCR、Western-blot对基因修饰细胞进行活力和凋亡基因检测。结果显示，已成功构建IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系，IGF2R基因表达量极显著下调（P ＜0.01）。基因修饰细胞活力在72 h时极显著上升（P ＜0.01），并且含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase9）和BCL-2关联X（BCL2-associated X,BAX）蛋白的水平显著下调（P ＜0.05），并且B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,BCL2）基因的mRNA水平极显著上升（P ＜0.01）。成功构建了IGF2R基因精确修饰的PK-15细胞系，并初步进行了功能研究，为研究IGF2R基因功能提供细胞模型，并为后续基因编辑猪的制备奠定基础。

分类号： Q78%S828

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