文献类型： 中文期刊
第一作者： 敖叶
作者： 敖叶;陈祥;周志楠;骆金红;韦仕南;张艳;惠茂茂;吴雨;杨沛方
作者机构：
关键词： 黔北麻羊;TGFβ2基因;PPP3CA基因;卵巢颗粒细胞;差异表达
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2020 年 51 卷 011 期
页码： 2699-2709
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TG Fβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制.本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象.通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平;构建目的基因真核表达载体.培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞,并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞,检测培养基中雌二醇(E2)、孕酮(P4)的浓度.利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响.随后,利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响.RT-qPCR结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达,且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组;免疫荧光法证实,所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞;TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后,在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时,能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达(P<0.01).细胞增殖与凋亡结果显示,TG Fβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡,抑制其增殖.酶联免疫吸附试验结果表明,TG Fβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌,但对P4的分泌无显著影响.本研究成功构建了TG Fβ2、PPP3CA基因真核表达载体,荧光定量结果表明,超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达,提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响.为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据.
分类号： S827.2%S827.3
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