幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆表达及活性测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蔡靓

作者： 蔡靓;李克生;杜惠芬;付宝权;李文卉

作者机构：

关键词： 幽门螺杆菌;尿素酶B亚单位;原核表达;免疫原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 03 期

页码： 283-288

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(UreB)的免疫学活性,采用PCR方法扩增Hp UreB基因,经双酶切构建表达载体pET28a-UreB,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经过IPTG诱导进行表达,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blot鉴定。结果显示,扩增的Hp UreB基因序列与GenBank中的26 695标准株序列相比较核苷酸序列同源性达到96.73%,氨基酸序列同源性高达99.30%,SDS-PAGE分析发现表达的重组蛋白分子质量约为66ku,以可溶性形式存在。Western-blot结果显示重组UreB能被Hp感染患者血清特异性识别,同时,用纯化后的UreB蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,表明UreB具有很好的免疫原性。试验证明表达出具有生物活性的UreB蛋白,为Hp快速检测方法的研究奠定了基础。

分类号： S852.613

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