延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 彭永刚

作者： 彭永刚;陈海迪;高旭;张颖;鲁承

作者机构：

关键词： 延边白鹅;α干扰素;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 05 期

页码： 527-531

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以本实验室构建的鹅pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上。将构建的重组质粒pET-30aIFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定。结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-α并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32。本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础。

分类号： S852.4

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