草菇漆酶基因vv-lac1和vv-lac6的克隆及异源表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴林

作者： 吴林;阳经慧;陈明杰;汪虹;鲍大鹏

作者机构：

关键词： 草菇;漆酶基因;异源表达;漆酶活性

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2014 年 54 卷 07 期

页码： 828-835

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆草菇漆酶基因vv-lac1和vv-lac6的全长cDNA,证实其编码的蛋白具有漆酶活性,最终建立草菇漆酶基因的异源表达及纯化体系。【方法】利用RACE技术克隆全长cDNA序列,并利用生物信息学技术进行序列分析,在此基础上,去除全长cDNA的编码信号肽的序列并在3'端添加His-tag碱基序列,把修饰后的cDNA片段克隆到表达载体pPIC9K上,并转化到毕赤酵母GS115中进行表达,对重组蛋白利用Ni柱进行分离纯化并以ABTS底物法检测重组蛋白的漆酶活性。【结果】vv-lac1和vv-lac6的全长cDNA的长度分别为1599 bp和1554 bp,且分别含有19和15个外显子;其编码的蛋白的理论分子量分别是57.3 kDa和56.3 kDa,理论等电点分别为4.73和5.62,且都属于分泌型的胞外蛋白;表达出的重组蛋白RBvvlac1和RBvvlac6,其分子量大小约为70 kDa,说明存在翻译后修饰;含有150 mmol/L咪唑的缓冲液对RBvvlac1和RBvvlac6发酵液进行洗脱所得到的蛋白溶液具有最高漆酶活性(333.17 U/L和227.63 U/L)。【结论】草菇漆酶基因vv-lac1和vv-lac6能够编码有活性的漆酶蛋白,本研究建立的异源表达及纯化体系适用于草菇或其它漆酶基因的异源表达与纯化。

分类号： Q943.2

  • 相关文献

[1]灰树花漆酶基因异源高效表达及对茜素红染料的脱色. 郑苗苗,伊洪伟,邵淑丽,李波,吴鹏,张令昂,焦战战,董银燕. 2015

[2]草菇基因组中11个漆酶同源基因的生物信息学分析及铜离子对其表达的影响. 吴林,朱刚,陈明杰,汪虹,鲍大鹏. 2014

[3]草菇过氧化氢酶基因(VvCAT1)异源表达及耐温度胁迫功能分析. 杨焕玲,常婷婷,赵妍,游华芳,查磊,李正鹏,仝宗军,陈明杰. 2021

[4]草菇锰超氧化物歧化酶基因异源表达条件优化及其耐胁迫功能分析. 杨焕玲,游华芳,赵妍,KAKUMYAN Pattana,常婷婷,余昌霞,陈明杰. 2020

[5]低温对蒙古口蘑菌丝体漆酶活性及其基因家族表达的影响. 刘晓婷,郭九峰,王淑妍,李亚娇,那日,高海荣,马梦宇. 2019

[6]香菇转录因子LeZNF143响应高温胁迫的功能分析. 王梅,宋婷婷,蔡为明,曲英敏,范丽军,胡心柔,金群力. 2024

[7]黄曲霉漆酶基因HIGS载体的构建及对花生的转化. 孙全喜,王云云,王秀贞,唐月异,吴琪,张青云,曹广英,王传堂. 2015

[8]玉木耳漆酶基因Aclac的克隆及原核表达. 苏文英,谭一罗,刘晓梅,杨和川,秦裕营,李晓,任立凯. 2021

[9]芳香族化合物对斑玉蕈菌丝生物量、漆酶活性及其转录水平的影响. 张津京,陈明杰,冯志勇,黄建春,宋晓霞,汪虹,陈辉. 2016

[10]漆酶基因Cglac10的缺失对杧果炭疽病菌无性繁殖和侵染能力的影响. 肖春丽,钟昌开,张梦婷,余姿蓉,董玲玲,谭晴,张贺,蒲金基,刘晓妹. 2021

[11]产漆酶细菌菌株的分离及基因克隆. 孙峥,许雷. 2008

[12]高效降解木质素及异生物质污染物的白腐真菌木质素降解酶漆酶的分子生物学研究. 杨洋,范芳芳,卓睿,万霞,江木兰,马富英,余洪波,邬建国,张晓昱. 2012

[13]金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究. 张银波,姜琼,江木兰,马立新. 2004

[14]平菇漆酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究. 张银波,江木兰,胡小加,张桂敏,马立新. 2005

[15]金针菇漆酶基因家族在不同农业废弃物培养基上表达情况. 李子豪,韩建东,谢红艳,胡清秀,宫志远,邹亚杰. 2021

[16]新月旋孢腔菌胞内漆酶的活性测定及漆酶基因ClLac1克隆. 李志勇,刘磊,曹志艳,董立,董志平. 2012

[17]米良1号猕猴桃漆酶基因的克隆与表达分析. 高敏霞,冯新,赖瑞联,胡艺贤,陈文光,吴如健,陈义挺. 2018

[18]产纤维素酶大肠杆菌工程菌的构建和酶的表达. 芦志龙,吴仁智,陈英,黄俊,陆琦,陈东. 2019

[19]细菌素异源表达的研究进展. 余占桥,杨芳,张日俊. 2010

[20]环糊精葡萄糖基转移酶高效异源表达研究进展. 李晓涵,郝建华,郭姣梅,王伟,孙晶晶,刘均忠. 2020

作者其他论文 更多>>

微信小程序