采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张志彬

作者： 张志彬;张健;贺明;高倍瑶;贾琪;张立春

作者机构：

关键词： 小干扰RNA(siRNA);口蹄疫(FMD);绿色荧光蛋白(GFP);多血清型;3C基因

期刊名称： 中国兽医杂志

ISSN： 0529-6005

年卷期： 2023 年 08 期

页码： 1-5

收录情况： 北大核心

摘要： 为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析，筛选出潜在抗多血清型siRNA位点；通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列，制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体；将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染，通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现，多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位，GFP-3C融合表达载体成功构建，与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞，GFP观察发现，siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h, Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现，siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。

分类号： S852.65

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