猪流行性腹泻病毒RAA-CRISPR/Cas13a检测方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘华

作者： 刘华;殷冬冬;邵颖;宋祥军;王振宇;潘孝成;涂健;何长生;朱良强;祁克宗

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;CRISPR/Cas13a;重组酶辅助扩增;N基因;检测

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 54 卷 009 期

页码： 3991-3997

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(por-cine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法.针对PEDV N基因保守区设计RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以RT-qPCR为对照方法,评价该方法的灵敏度、特异性及与RT-qPCR法的一致性.结果表明,该方法最低可检测至101 copies·μL-1,且与猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病病毒等常见猪源病原核酸检测无交叉反应.采用RAA-Cas13a检测40份临床样本与RT-qPCR方法阳性符合率为100%,阴性符合率为84.6%,总符合率为95%,Kappa值为0.881.本研究建立的RAA-Cas13a方法灵敏度高、特异性强,为PEDV的临床诊断和流行病学监测提供了可靠的技术手段.

分类号： S852.659.6

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