香菇中CRISPR/Cas9基因编辑体系的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 付阳

作者： 付阳;宋春艳;董晶晶;刘建雨;姜宁;章炉军;于海龙;尚晓冬;谭琦

作者机构： 上海市农业科学院食用菌研究所国家食用菌工程技术研究中心

关键词： 香菇;CRISPR/Cas9基因编辑技术;pyrG基因;尿嘧啶营养缺陷型;功能基因

期刊名称： 菌物学报

ISSN： 1672-6472

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 26-42

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 香菇Lentinula edodes是世界第二大食药用菌，具有较高的食用、药用、经济和生态学研究价值，探索其本身具备优良性状的调控机制，同时对可能参与其中的功能基因进行反义遗传学研究是十分必要的。本研究对已知的功能基因利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行编辑，确定该技术能在香菇中工作。预测并筛选出一个香菇U6snRNA启动子，以乳清苷-5'-磷酸脱羧酶编码基因pyrG为目的基因设计CRISPR/Cas9技术的重要工作元件sgRNA，对异源cas9基因依据香菇基因组密码子偏好性进行优化，构建了一个同时携带sgRNA和cas9基因的双元表达载体。利用农杆菌介导的香菇菌丝遗传转化技术将该载体转入香菇单核体中对pyrG基因进行编辑，成功获得pyrG基因发生碱基缺失的香菇单核体突变株，经功能筛选后确定其为尿嘧啶营养缺陷型单核体菌株。本研究成功构建了一个能同时表达CRISPR/Cas9技术重要组件的双元表达载体，证明了CRISPR/Cas9能够在香菇中发挥编辑目的基因的功能，为进一步开展香菇重要功能基因的研究奠定了良好的基础。

分类号： S646.12

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