棉花农杆菌基因转化体系的优化和转苜蓿抗菌肽基因(alfAFP)植株的获得

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张海平

作者： 张海平;王学德;邵明彦;袁淑娜;华水金;倪密

作者机构：

关键词： 棉花;农杆菌;基因转化

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2009 年 17 卷 06 期

页码： 1020-1026

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了优化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的棉花(Gossypium hirsutumL.)下胚轴切段的基因转化体系,以苜蓿(Medicago sativaL.)抗菌肽基因(alfla faantifungul peptide,alfAFP)为目标,利用β-葡萄糖甘酸酶基因(gus)和潮霉素抗性基因(Hpt)的检测方法,分析了根癌农杆菌菌种、菌液浓度、浸染下胚轴的时间、共培养中乙酰丁香酮(AS)的浓度、共培养温度和时间等因子对基因转化的影响。优化分析表明,用农杆菌菌株LBA4404,当OD600值为0.5～0.7的菌液浸染5～7日龄的棉花无菌苗下胚轴切段10～15min,在含200μmol/LAS的共培养基中21℃暗培养60h,可更有效地提高转化率。经上述条件处理的下胚轴在含50mg/L潮霉素的愈伤诱导培养基上培养3周可产生转化率最高的愈伤组织。愈伤组织经分化培养获得15株再生棉花,经过PCR和PCR-Southern分析,发现其中12株含有外源基因alfAFP。

分类号： S188`S562

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