猪TGF-βⅡ型受体胞外域的表达及生物活性验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵蕾

作者： 赵蕾;李辉;覃水平;李碧侠;戴超辉;赵为民;付言峰;邓彦飞;程金花

作者机构：

关键词： 转化生长因子β1Ⅱ型受体(TGFⅡR);原核表达;TGF-β1;生物活性

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2024 年 40 卷 007 期

页码： 1268-1275

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 转化生长因子β1Ⅱ型受体(TGFⅡR)是TGF-β家族的主要受体。现有研究发现，TGF-β1在家畜繁殖活动中起着负调控作用，因此我们提出通过重组TGFⅡR胞外域蛋白质竞争性结合体内TGF-β1以改善家畜繁殖性能的新思路。首先，对猪TGFⅡR胞外域蛋白质编码序列进行密码子优化并进行人工合成，将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+)中。然后，将重组表达载体转入BL21(DE3)表达菌株中，并筛选合适的乳糖诱导浓度、诱导时间，以获得最高表达效率。再然后，对重组蛋白质进行纯化、复性及质谱鉴定。最后，通过体外细胞试验对重组蛋白质的生物活性进行测定。结果表明，在培养温度为37℃、培养时间为8 h、乳糖诱导质量浓度为2.0 g/L的条件下，可以诱导重组蛋白质的高表达，用8 mol/L尿素对包涵体蛋白质进行溶解，再以生理盐水为透析液透析24 h后，可以获得纯度达80%以上的重组猪TGFⅡR胞外域蛋白，用该重组蛋白质处理猪颗粒细胞后，可显著抑制TGF-β1诱导的信号分子Smad3的磷酸化水平。可以看出，本研究中表达的重组猪TGFⅡR胞外域蛋白质具有较好的生物活性。研究结果可为进一步研究和开发有利于提高猪繁殖效率的产品奠定工作基础。

分类号： S828

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