柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢帆

作者： 谢帆;龚顺;王泽琼;肖玉雄;杜志强;仝铸;何秀娟;邱文明;孙中海;潘志勇;肖翠

作者机构：

关键词： 柑橘黄龙病;常规PCR;巢式PCR;绝对定量PCR;引物评价

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 234-246

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害，目前没有可用的有效药剂和抗病品种，分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价，针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因，构建质粒标准品并筛选适用于绝对定量PCR的最佳质粒。结果表明，使用Es Taq MasterMix对感染Candidatus Liberibacter asiaticus （CLas）的柑橘样品进行常规PCR检测时，在评价的16对引物中，OI1/OI2c、Las606/LSS和HLBF468/R877灵敏度最高，推荐同时使用检测黄龙病菌含量低的样品；各组巢式PCR检测引物有其适用扩增体系，部分引物用Es Taq MasterMix扩增时出现非特异性扩增，F1/B1→F3/B3则适用Es Taq MasterMix体系，且最高可稳定特异检出10~5倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品(2×10-3 ng/μL),是灵敏度最高的引物组，OI1/OI2c→S3/S4在Es Taq MasterMix和Ex Taq DNA聚合酶体系中均可稳定特异检出10~4倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品(2×10-2 ng/μL),是适用扩增体系最广的引物组；构建的5个绝对定量PCR质粒标准品中，pnrdB83扩增效率最接近100%,且在2次重复试验中波动最小，稳定性最强，并且作为标准品对黄龙病待测样品进行绝对定量时，各样品在2次重复试验中的拷贝数差值最小，是本研究筛选的最佳质粒。本研究的结果将为柑橘黄龙病菌的定性和定量分子检测提供参考。

分类号： S436.66

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