实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数

文献类型： 中文期刊

第一作者： 付立霞

作者： 付立霞;高雯;韩先干;高波;张晓君;刘晓丹;曾令兵

作者机构：

关键词： 爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri);隐蔽质粒;质粒拷贝数;实时定量PCR

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 63-70

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数,同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率。结果显示,以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和p EI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63±0.30、5.04±0.18和4.22±0.15、5.13±0.50,显著低于以水煮法测得的pEI1和p EI2拷贝数的绝对定量11.84±0.80、11.70±0.25和相对定量13.85±1.64、11.90±0.97。回收率结果显示,试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8±4.1)%,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1±0.5)%和pEI2的回收率(31.3±1.7)%。结果表明:通过实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时,基因组的制备以水煮法为宜,爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒。

分类号： S941.42

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