嗜酸古菌Cuniculiplasma divulgatum来源的GH1家族中温β-葡萄糖苷酶CdBglA的原核表达及酶学性质分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何金见

作者： 何金见;沈风飞;刘鑫涵;杨天均;李宝通;石鹏君;刘慧芹;曾婉宁

作者机构：

关键词： 嗜酸古菌;GH1家族;β-葡萄糖苷酶;乙醇耐受性;酶学性质

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2023 年 011 期

页码： 4694-4707

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 葡萄糖苷酶在食品、医药、生物质转化等领域具有重要的应用价值，因此发掘适应性强、性质优良的β-葡萄糖苷酶是国内外研究的热点。本文对尚未报道的来源于嗜酸古菌（Cuniculiplasmadivulgatum）GH1家族的葡萄糖苷酶进行了克隆表达和酶学性质测定，以期找到更优的β-葡萄糖苷酶。从NCBI数据库中获取了C. divulgatum来源的GH1葡萄糖苷酶氨基酸序列，然后制备重组质粒pET-30a（+）-CdBglA，并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达重组蛋白，对纯化后的CdBglA进行酶学性质研究。结果发现，重组酶CdBglA的分子量为56.0 kDa，最适pH为5.5，最适温度为55℃。该酶具有良好的pH稳定性，在pH 5.5-11.0范围内处理1 h，仍维持92.33%以上的酶活力。以p NPG为底物时的酶促反应动力学参数Km、Vmax和Kcat/Km分别为0.81 mmol、291.99μmol/（mg·min）和387.50s-1mmol-1。其在终浓度5mmol/L重金属离子的影响下均能保持90.33%以上的酶活力；在15%的乙醇溶液中酶活力被提高了28.67%，在20%的乙醇溶液中酶活力保持不变，在30%的乙醇溶液中仍保持43.68%的酶活力；该酶在0-1.5 mol/L的Na Cl溶液中具有明显的激活作用并且可以耐受0.8mol/L葡萄糖。本研究表明，CdBglA是酸性中温酶，具有宽泛的pH稳定性，且对大部分金属离子、有机溶剂、NaCl和葡萄糖都具有很强的耐受性。这些特征在以后的理论研究及在工业生产中具有一定的科学价值。

分类号： Q789

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