大菱鲆胰岛素样生长因子-I成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵晓杰

作者： 赵晓杰;陈松林;王娜;王贤丽;邢士超

作者机构：

关键词： 胰岛素样生长因子-I;cDNA克隆;重组表达;包涵体;融合蛋白

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2010 年 34 卷 01 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在Escherichia coli BL21(DE3)plysS中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku,诱导4h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别。包涵体经6mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrapFF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。

分类号： S917.4

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