猪水泡病病毒HK′1/70株基因组全长cDNA的构建及其序列测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郑海学

作者： 郑海学;刘湘涛;尚佑军;张淼涛;冯霞;白兴文;吴锦艳;吕建亮;孙世琪;尹双辉;郭建宏;谢庆阁

作者机构：

关键词： 猪水泡病病毒;RACE;全长cDNA克隆;分子克隆

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2007 年 23 卷 01 期

页码： 51-56

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDVHK′1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3′PCR片段和5′PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体。利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5′PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3′PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK′1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定。结果表明,HK′1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5′NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3′NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾。在HK′1/70株全长cDNA序列的5′端引入了T7启动子序列,在poly A3′端引入了Psp1406Ⅰ识别序列。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK′1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上。HK′1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础。

分类号： S852.65

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