小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 许炼

作者： 许炼;高焕娟;潘志针;朱育菁;陈清西;刘波

作者机构：

关键词： 小菜蛾;氨肽酶基因;基因分析;原核表达;酶活性;配体印迹;同源建模

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2014 年 57 卷 11 期

页码： 1272-1280

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。

分类号： S433.4

  • 相关文献

[1]小菜蛾碱性磷酸酯酶受体表达与分子模拟. 张霄,胡晓丹,仲建锋,武爱华,徐重新,刘媛,张存政,谢雅晶,刘贤金. 2016

[2]小菜蛾钙黏蛋白PxCR_(10-11)结构域的克隆、原核表达及功能分析. 许炼,刘波,潘志针,朱育菁,高焕娟,陈清西. 2017

[3]鹅IGF-Ⅰ基因cDNA的克隆、分析与原核表达. 王雷,王宝维,贾晓晖,杨志刚,刘光磊. 2008

[4]铜绿丽金龟气味结合蛋白AcorOBP11的表达纯化及功能分析. 秦健辉,李金桥,赵旭,李克斌,曹雅忠,尹姣. 2021

[5]玫烟色棒束孢SCAU-IFCF01产酶特性研究. 雷妍圆,吕利华,何余容. 2017

[6]溴虫氟苯双酰胺对小菜蛾的毒力及相关酶活性的影响. 崔丽,王芹芹,刘峰,芮昌辉. 2017

[7]乙基多杀菌素抗性小菜蛾代谢解毒酶酶活性研究. 尹飞,陈焕瑜,冯夏,胡珍娣,林庆胜,李振宇,包华理. 2016

[8]小菜蛾类钙粘蛋白片段的原核融合表达载体构建及其条件优化. 郑晓旭,杨峰山,朱勋,张友军. 2013

[9]苹果细胞质型苹果酸脱氢酶基因克隆、表达及酶活性分析. 姚玉新,郝玉金,李明,庞明利,刘志,翟衡. 2008

[10]水稻Os4CL5的Val337缺失突变激活其芥子酸催化活性. 罗兵,赵敏欢,李朋朋,杨志刚. 2016

[11]家蚕丙酮酸脱氢酶激酶基因的克隆与原核表达. 宋海韬,王力刚,沈兴家,黄勇,赵巧玲. 2011

[12]魔芋软腐病pelD和pelE基因的克隆与表达分析. 陈恩发,刘辉,丁海兵,潘牧,王启富. 2021

[13]拟南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析. 郭坤元,张欣欣. 2020

[14]拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6克隆及功能分析. 郭坤元,张欣欣. 2020

[15]鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定. 何随彬,谭磊,包世俊,郭小琴,仇旭升. 2013

[16]柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析. 廖申权,吴彩艳,戚南山,李娟,吕敏娜,张健騑,谢明权,孙铭飞. 2015

[17]鲤鱼2种脂酰辅酶A脱氢酶基因cDNA克隆、表达及活性研究. 喻文娟,俞菊华,李红霞,李建林,唐永凯,于凡,何枫,傅纯洁. 2017

[18]绿盲蝽磷脂酶C(AlPLC)的表达、纯化及酶学性质. 谭永安,赵旭东,郝德君,肖留斌,柏立新,赵静,孙洋,姜义平. 2017

[19]少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶基因AO-190的克隆、表达及其酶活性的测定. 贡莎莎,孟庆玲,乔军,钟文强,黄运福,张国武,陈英,才学鹏. 2018

[20]鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的克隆表达及其表达产物活性研究. 任峰,谭磊,包世俊,张凡庆,陆凤,仇旭升,宋翠萍,孙英杰,陈书明,丁铲. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序