禽DNA病毒三重PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱庆贺

作者： 朱庆贺;苗艳;陈曦;王爽;杨旭东;王观悦;田秋丰;史同瑞

作者机构：

关键词： 4型禽腺病毒;传染性喉气管炎病毒;禽痘病毒;多重PCR;DNA病毒;诊断

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2020 年 008 期

页码： 80-82,94

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立可以同时检测4型禽腺病毒(FAdV-4)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、禽痘病毒(FPV)的方法,试验参考GenBank上登录的FAdV-4、ILTV、FPV的基因序列保守片段分别设计引物,优化PCR扩增体系和扩增程序,建立针对以上三种病毒的三重PCR检测方法,并考察方法的特异性、敏感性及对临床样品检测的准确性.结果 表明:最终确定三重PCR最佳扩增体系(50μL)为,FADV-4、ILTV、FPV DNA各5μL,10×Buffer 5μL,dNTP Mix10 μL,Mg2+5 μL,Taq3 μL,引物ILTV-R0.4 μL,ILTV-F 0.4μL,FPV-F 0.8μL,FPV-R 0.8μL,FAdV-R 1.8μL,FAdV-F 1.8 μL,ddH2O6μL.三重PCR最佳扩增程序为95 ℃预变性5 min;95 ℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环;72 ℃终延伸10 min;4℃结束反应.所建立的检测方法只能扩增FAdV-4、IL-TV、FPV,而不能扩增鸡马立克病毒(MDV)、减蛋综合征病毒(EDSV),特异性强;该方法对FAdV-4、ILTV、FPV的最低核酸检测量分别为3.01 pg、19.50 pg、25.70 pg,敏感性好;采用建立的三重PCR方法对黑龙江地区临床患病鸡样品进行检测,其扩增结果与单一PCR扩增结果一致,符合率100%.说明该方法快捷、敏感、特异性强,能够实现对FAdV-4、ILTV和FPV的快速鉴定.

分类号： S852.65%S858.3

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