鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘伟

作者： 刘伟;高玉龙;高宏雷;王笑梅;许修宏

作者机构：

关键词： 鸡胚成纤维细胞(CEF);Gateway技术;cDNA表达文库;传染性法氏囊病病毒(IBDV)

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2007 年 47 卷 3 期

页码： 413-417

收录情况： CSCD

摘要： 鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×10~6cfu/mL,文库总容量为1.2×10~7cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×10~5cfu/mL,文库总容量为5.5×10~6cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。

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