流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 葛叶

作者： 葛叶;邓国华;李雪平;陈化兰

作者机构：

关键词： PB1基因;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 09 期

页码： 726-729

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细胞株CGFF10和FGFCE5,2株杂交瘤细胞的细胞培养上清及腹水效价分别为103、103和106、107。2株MAb的亚类均为IgG1。实验证明:所制备的MAb能与H5N1亚型PB1-1抗原发生特异反应,具有免疫活性,从而为PB1结构及功能的深入研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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