牛抗菌肽Bac7-Bac5-βdefense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析

文献类型: 中文期刊

第一作者: 赵昆

作者: 赵昆;刘思国;王春来;宫强;迟磊;刘建东;王勇;云孟克;刘慧芳;孙延鸣

作者机构:

关键词: 牛抗菌肽;Bac7、Bac5和β defense融合基因;昆虫杆状病毒表达系统;spodoptera fragiperda 9 (Sf9)细胞;重组表达;抑菌活性

期刊名称: 农业生物技术学报

ISSN: 1006-1304

年卷期: 2008 年 16 卷 03 期

页码: 380-384

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bac5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-Bac5-βdefense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾Sf9单层细胞,收集Sf9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%。体外抑菌实验表明重组的r Bac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性。

分类号: Q78

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