文献类型： 中文期刊

第一作者： 余新刚

作者： 余新刚;袁凯健;李奕龙;穆宣儒;许辉;李巧雨;曾文静;傅志强;洪炀

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;热休克同源蛋白20;克隆;表达;免疫保护效果

期刊名称： 中国血吸虫病防治杂志

ISSN： 1005-6661

年卷期： 2025 年 37 卷 003 期

页码： 294-303

收录情况： CSCD

摘要： 目的 克隆、表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)热休克同源蛋白20(heat shock cognate protein 20,Hsc20)(SjHsc20),并对其生物学特性进行初步研究.方法 采用PCR法扩增SjHsc20基因目的片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-SjHsc20,并将其转化入大肠埃希菌BL21(DE3).采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalacto-pyranoside,IPTG)诱导表达并纯化重组SjHsc20(rSjHsc20)蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium do-decyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)验证重组蛋白表达,采用 Western blotting检测重组蛋白免疫原性.采用实时荧光定量 PCR(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测 SjH-sc20基因在不同发育期虫体及不同性别成虫中的转录水平.30只雌性6~8周龄BALB/c小鼠随机分为rSjHsc20免疫组、PBS对照组、ISA 206佐剂组,每组10只.在实验第1、15、31天,rSjHsc20免疫组、PBS对照组、ISA 206佐剂组小鼠分别皮下免疫注射20 μg rSjHsc20重组蛋白及等体积PBS和ISA 206佐剂,最后1次免疫14 d后,各组小鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(40±2)条.采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清抗rSjHsc20特异性IgG及其亚型IgG1、IgG2a抗体水平,以及血清中抗rSjHsc20抗体滴度,并计算IgG1/IgG2a比值.感染42 d后,剖杀各组小鼠,采用肝门静脉灌注法收集虫体并计数,计算每克肝脏虫卵数(eggs per gram,EPG)以及rSjHsc20免疫组相对于PBS对照组的减虫率和减卵率,以评估rSjHsc20蛋白免疫保护效果.结果 SjHsc20基因开放阅读框长756 bp、编码252个氨基酸,rSjHsc20蛋白相对分子质量约为29 kDa.rSjHsc20可被感染日本血吸虫的小鼠血清以及免疫该蛋白后获得的小鼠血清识别.7、12、21、28、35、42 d虫体SjHsc20基因相对转录水平分别为1.001 4±0.065 7、2.268 3±0.129 2、1.378 5±0.1604、1.1964±0.2440、1.6463±0.226 1、1.758 0±0.611 1,差异有统计学意义(F=38.45,P<0.000 1),其中12 d虫体内SjHsc20基因转录水平高于其他时期虫体(P均<0.05).第3次免疫后,PBS对照组、ISA206佐剂组和rSjHsc20免疫组小鼠血清IgG抗体水平分别为0.106 6±0.010 7、0.108 3±0.010 4、0.553 2±0.069 1,IgG1抗体水平分别为0.137 3±0.054 0、0.181 1±0.096 8、1.765 8±0.221 1,IgG2a抗体水平分别为0.280 3±0.197 6、0.2740±0.146 3、1.5604±0.106 0,差异均有统计学意义(F=397.70、401.00和229.70,P均<0.000 1);两两比较结果显示,rSjHsc20免疫组小鼠血清IgG、IgG1和IgG2特异性抗体水平均高于其他两组(P均<0.000 1).3组小鼠血清IgG1/IgG2a比值分别为0.428 4±0.199 8、0.559 9±0.181 1、1.177 2±0.143 6,差异有统计学意义(F=43.97,P<0.000 1);rSjHsc20免疫组IgG1/IgG2a 比值>1,且高于PBS对照组和ISA 206佐剂组(P均<0.001).3次免疫后,rSjHsc20免疫组小鼠血清抗体滴度均在1∶16 384以上,表明rSjHsc20具有较强免疫原性.在尾蚴攻击42 d后,PBS对照组、ISA 206佐剂组、rSjHsc20免疫组小鼠平均虫荷数分别为(16.60±5.75)、(15.80±5.58)、(14.40±5.75)条/鼠,差异无统计学意义(F=0.50,P>0.05);3组小鼠EPG分别为68 370±22 690、67 972±19 502、41 075±13 251,差异有统计学意义(F=4.55,P<0.05);两两比较结果显示,PBS对照组和ISA 206佐剂组EPG均低于rSjHsc20免疫组(P均<0.05).rSjHsc20免疫组小鼠减虫率和减卵率分别为13.25%和39.92%.结论 成功克隆、表达了SjHsc20基因,rSjHsc20蛋白可诱导小鼠产生一定的免疫保护效果.上述结果为后续研究SjH-sc20生物学功能及评估其作为疫苗候选分子的潜能奠定了基础.

分类号： R383.24