莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王锦明

作者： 王锦明;刘军龙;刘爱红;马米玲;牛庆丽;任巧云;杨吉飞;刘志杰;李有全;罗建勋;殷宏;关贵全

作者机构：

关键词： 莫斯巴贝斯虫;cDNA表达文库;免疫筛选;RACE

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2012 年 43 卷 12 期

页码： 1931-1937

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。结果表明构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆。测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。

分类号： S852.723

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