黄地老虎颗粒体病毒DNA的基因文库和物理图谱

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邱并生

作者： 邱并生;裴美云;艾秀莲;石玉瑚;吴祖银

作者机构：

关键词： 黄地老虎颗粒体病毒DNA;基因文库;物理图谱

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 1986 年 03 期

页码： 210-215，294

摘要： 利用EMBL 4——携带多切点连接序列的λ取代载体,建成了黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)DNA基因文库,并绘制出AsGV DNA基因组的物理图谱。当体外包装效率达3×10~7pFU/μg DNA时,Sal I和BamHI双酶完全酶切的EMBL 4和Bam HI部分酶切的AsGV DNA,按2:1的接头克分子比,用T4连接酶连接后,在BHB2688与2690体系中进行体外包装,再经在L 95和ED 8654中的转染和转导,获得1.5×10~3噬菌斑。根据Clarke和Carbon公式,筛选概率达到复盖99%的AsGV基因组只需35个重组噬菌斑。我们随机挑取了35个重组噬菌斑,经快速琼脂糖凝胶电泳分析得到13个不同类型的重组噬菌斑,以~(32)P标记的AsGV DNA为探针进行分子杂交,确定了BamHI在AsGV DNA基因组上位点的相邻位置。

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