旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 盖文燕

作者： 盖文燕;李文卉;王鸿盛;姚菊霞;曲自刚;王艳华;张德林;付宝权

作者机构：

关键词： 旋毛虫;丝氨酸蛋白酶抑制因子;重组蛋白;抗原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2010 年 05 期

页码： 470-474

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

分类号： S852.731

  • 相关文献

[1]旋毛虫TsP53重组蛋白对小鼠的免疫保护性. 王鸿盛,李文卉,盖文燕,姚菊霞,曲自刚,王艳华,张德林,薛慧文,付宝权. 2010

[2]旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定. 孙树民,吴秀萍,王学林,付宝权,卢强,李莲瑞,郭恒,P.Boireau,陈启军,刘明远. 2007

[3]旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达及抗原性分析. 盖文燕,李文卉,王鸿盛,姚菊霞,曲自刚,王艳华,张德林,付宝权. 2009

[4]旋毛虫TsP53抗原基因的原核表达及抗原性分析. 王鸿盛,李文卉,盖文燕,姚菊霞,曲自刚. 2010

[5]日本血吸虫magonashi基因的克隆、表达及功能初步分析. 彭金彪,韩宏晓,洪炀,王欣之,石耀军,傅志强,刘金明,程国锋,林矫矫. 2009

[6]日本血吸虫SjPRMT1基因的克隆、表达及免疫保护效果分析. 韩宏晓,彭金彪,洪炀,王欣之,石耀军,傅志强,刘金明,程国锋,李祥瑞,林矫矫. 2009

[7]猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析. 和燕玲,房永祥,陈国华,刘磊,景志忠. 2009

[8]青虾(Macrobrachium nipponense)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子基因全长cDNA的克隆及表达. 张响,乔慧,傅洪拓,吴滟,龚永生,蒋速飞,熊贻伟. 2012

[9]不同发育时期旋毛虫脂肪酸组成的研究. 赵风强,路义鑫,韩彩霞,张晓波,兰静,宋铭忻. 2010

[10]旋毛虫p49抗原基因克隆体外表达条件的研究. 张伟光,蔡海松,林新坚,刘光明,宋思扬,苏文金. 1998

[11]旋毛虫半胱氨酸蛋白酶基因TsCP1的克隆与序列分析. 曲自刚,李文卉,谢志宙,刘静宜,王艳华,张德林,付宝权,牛廷献. 2012

[12]不同pH值条件下培养旋毛虫TsGLS mRNA的表达变化. 赵祥,于洁,胡静,许静秀,韩彩霞,李晓云,宋铭忻. 2018

[13]旋毛虫肌幼虫ES Ag单克隆抗体的制备与特性鉴定. 李学伍,杨艳艳,王自良,肖治军,柴书军,张改平. 2008

[14]旋毛虫成虫可溶性抗原对猪的免疫保护作用研究. 朱兴全,窦兰清,史晓红,石磊,牛炳亨. 1996

[15]猪旋毛虫病疫苗的区域试验. 史晓红,朱兴全,窦兰清,牛炳亨,石磊,龚广学,杨书军,薛富汉,归有泽. 1994

[16]旋毛虫基因重组抗原对小鼠的免疫保护试验. 阎玉河,马增全,陈辉,许威光,李春华. 1995

[17]旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因TsCystatin1的克隆及序列分析. 姚菊霞,李文卉,盖文燕,曲自刚,谢志宙,王艳华,张德林,付宝权. 2011

[18]旋毛虫南阳猪体分离株的生物学特性研究. 肖治军,张改平,邓瑞广,李学伍,杨艳艳,柴书军,赵东,邢广旭,杨继飞. 2008

[19]旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆与生物信息学分析. 刘静宜,李文卉,曲自刚,高小磊,岳龙. 2014

[20]旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析. 李莲瑞,付宝权,卢强,韩文瑜,刘明远. 2008

作者其他论文 更多>>

微信小程序