苦瓜基因组DNA的提取及ISSR扩增体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 田丽波

作者： 田丽波;谷幸幸;商桑;杨衍

作者机构：

关键词： 苦瓜;基因组DNA;提取方法;ISSR;优化体系

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2013 年 29 卷 04 期

页码： 88-93

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了快速获取高质量的苦瓜基因组DNA,以便进行苦瓜白粉病抗性基因分子标记研究,比较了不同的DNA提取方法、不同部位的苦瓜叶片提取基因组DNA的产量和质量,探究了苦瓜基因组DNA提取的最佳方法和叶片的最适部位;研究了ISSR-PCR的退火温度,并采用正交设计法对影响ISSR-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq酶、模板DNA以及引物浓度等5个因素进行了优化。结果表明,采用改良CTAB法从苦瓜顶端嫩叶中提取的基因组DNAOD260/OD280值在1.8～1.9之间,OD260/OD230值为2.0左右,对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳检测,主带清晰,降解较少,产量和纯度均较高,效果较好。优化后的ISSR-PCR反应体系为:2.5μL10×PCRbuffer,2.5mmol/LMgCl2,250μmol/LdNTPs,10ng模板DNA,0.75UTaq酶,引物浓度0.7μmol/L,反应总体积为25μL,引物UBC826最佳退火温度为53℃。该体系在多次重复中均能获得良好的扩增结果。苦瓜基因组DNA提取的最佳方法为改良CTAB法,最适合的部位为顶端嫩叶。

分类号： S642.5

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