荧光定量PCR与LAMP检测IHHNV的特异性和灵敏性比较

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵哲

作者： 赵哲;任春华;江晓;张吕平;冯娟;胡超群

作者机构：

关键词： 荧光定量PCR;LAMP;IHHNV;特异性;灵敏度

期刊名称： 水生生物学报

ISSN： 1000-3207

年卷期： 2010 年 34 卷 05 期

页码： 984-989

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖对虾的重要病毒性病原之一,给对虾养殖业造成严重经济损失。研究建立了检测IHHNV的荧光定量PCR和环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种技术,并对它们的特异性和灵敏性进行了比较。结果显示,所建立的荧光定量PCR检测IHHNV的方法最低检测限度为6个DNA拷贝/反应,在待扩增DNA浓度为6.038×104-6.038×109cps/mL范围时,模板浓度与循环阈值Ct之间的相关性良好,决定系数r2为0.99521;对5份白斑综合症病毒基因组DNA和10份健康对虾基因组DNA样品进行荧光定量PCR检测,结果都为阴性;这说明荧光定量PCR检测IHHNV方法具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。同样,所建立的LAMP检测IHHNV的方法在60min反应时间内也可检测到最低为6个拷贝的DNA模板,反应产物加入荧光染料SYBR Green I后反应液呈现明显的亮绿色,且特异的检测IHHNV DNA模板;这说明所建立的LAMP检测IHHNV的方法具有荧光定量PCR方法相当的灵敏度、特异性和精确性。考虑到LAMP检测方法操作更为简单、方便,而且不需要昂贵的仪器,LAMP检测IHHNV的方法更适合于对虾养殖现场检测的推广使用。

分类号： S945.1

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