新型冠状病毒S蛋白RBD区的重组猫疱疹病毒的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王凤杰

作者： 王凤杰;周鑫韬;齐宇;韩桪;蒋依倩;陈腾;扈荣良

作者机构：

关键词： 新型冠状病毒;刺突蛋白;受体结合域;猫疱疹病毒Ⅰ型;免疫原性

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 023 期

页码：

收录情况： 北大核心

摘要： 为了开发一种猫用新型冠状病毒（SARS-CoV-2）重组猫疱疹病毒活载体疫苗，试验以猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-Ⅰ）为病毒载体，采用同源重组技术将亲本病毒FHV-Z的gI和gE基因替换为SARS-CoV-2刺突蛋白（S蛋白）的受体结合域（RBD）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP蛋白）串联表达盒；利用Overlap PCR方法构建包含RBD-EGFP串联表达盒的重组质粒pUC19-RBD-EGFP,并用该重组质粒与FHV-Z基因组共同转染F81细胞，通过有限稀释法和绿色荧光病变灶筛选完成重组病毒rFHV-RBD的纯化；经PCR、测序、间接免疫荧光试验（IFA）和Western-blot方法分析重组病毒rFHV-RBD;用1×107.0TCID50/mL的重组病毒rFHV-RBD滴鼻免疫猫，利用ELISA方法监测免疫后第0,7,14,21天猫体内特异性抗RBD抗体变化情况。结果表明：试验成功拯救了重组病毒rFHV-RBD,该重组病毒连续传代15代仍能检测到RBD-EGFP串联表达盒，遗传稳定性较好，重组病毒rFHV-RBD的生长特性与亲本病毒FHV-Z无明显差异，能够在重组病毒感染的F81细胞中正确表达S-RBD蛋白，滴鼻免疫猫后第21天特异性抗RBD抗体极显著升高（P＜0.01）。说明试验获得的重组病毒rFHV-RBD具有良好的免疫原性，可用于开展猫新型冠状病毒肺炎疫苗的研究。

分类号： S852.65

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