猪嵴病毒结构蛋白VP0与VP1原核表达及间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈俊强

作者： 沈俊强;张莉萍;于瑞明;王永录;潘丽;刘霞;刘新生

作者机构：

关键词： 猪嵴病毒;VP0;VP1;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 生物技术通报

ISSN：

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 243-253

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 分别建立基于猪嵴病毒（PKV）结构蛋白VP0与VP1的间接ELISA检测方法。对PKV结构蛋白VP0与VP1的基因进行合成并连接至原核表达载体pET-32a后，转入感受态细胞BL21中，用IPTG诱导表达的重组蛋白经Ni柱纯化后，分别以重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1作为包被抗原，采用棋盘滴定法建立两种间接ELISA检测方法，并进行重复性、敏感性、特异性实验和临床检测。结果显示重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1抗原的最佳包被浓度分别为2 mg/mL和2.5 mg/mL，反应条件均为37℃、1 h；封闭液最佳条件为5%脱脂乳，37℃、2 h；血清最佳孵育条件为1∶200，37℃、1 h；二抗最佳孵育条件分别为1∶20 000和1∶15 000，37℃、1 h；最佳显色时间为10 min，两种间接ELISA检测方法临界值分别为0.306和0.277。试验结果表明本研究成功建立了能够有效检测PKV血清特异性抗体的间接ELISA方法，且方法具有重复性好、敏感性高、特异性强、稳定性好等特点，对今后PKV的临床诊断及抗体检测试剂盒的开发奠定了重要基础。

分类号： S852.65

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