应用抑制性差减杂交技术分离椪柑枯水相关基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨明

作者： 杨明;王日葵;周炼;葛文东;焦雁翔

作者机构：

关键词： 椪柑;抑制性差减杂交;枯水;表达序列标签;差减文库;聚类分析

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2012 年 45 卷 05 期

页码： 917-925

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探索椪柑枯水分子机理,寻找柑橘枯水应答基因,为柑橘枯水防治奠定基础。【方法】利用抑制性差减杂交技术以椪柑正常果肉cDNA作为Driver,以枯水果肉cDNA作为Tester构建正向差减文库。【结果】挑选了300个有效克隆进行测序分析,260个测序成功。经BLASTx比对分析,197条表达序列标签(ESTs)找到了分属于52个基因的同源序列;63条ESTs同源性较低或没有同源性。对文库中编码β-微管蛋白、衰老相关蛋白、细胞色素c、半胱氨酸蛋白酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、转运蛋白、天冬氨酸蛋白酶前体、WRKY转录因子21的基因进行实时定量RT-PCR验证,结果显示这8个基因均明显上调表达。这些差异性表达基因主要涉及衰老、抗逆防御、几丁质和细胞壁代谢、蛋白降解等过程。【结论】通过构建椪柑果肉枯水正向文库,得到一些与枯水相关的基因,这些基因反映了果实对枯水的调控情况,可作为今后防治枯水病害的候选基因。

分类号： S436.66

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