猪IFN-α8的原核表达及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 方剑玉

作者： 方剑玉;张青娴;郎利敏;徐彬;王改利;席燕燕;冯现明;王克领;李绍钰

作者机构：

关键词： 猪干扰素α8;大肠杆菌表达;猪繁殖与呼吸综合征病毒;干扰素刺激基因;抗病毒活性

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2023 年 52 卷 009 期

页码： 141-147

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为确定猪干扰素α8(poIFN-α8)蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗病毒作用,合成poIFN-α8基因,克隆入pCSMH大肠杆菌表达载体,将重组表达载体转化DH5α感受态细胞,进行温度诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳.将表达的目的蛋白利用Ni-琼脂糖凝胶纯化柱纯化后,采用Western blot试验检测重组poIFN-α8的反应原性,利用猪肺泡巨噬细胞(PAM)检测0.01、0.05、0.1、1 ng/mL的重组poIFN-α8蛋白对PRRSV的抗病毒活性,并检测重组poIFN-α8蛋白对下游干扰素刺激基因(ISG)Mx1、OAS1、ISG15的诱导激活作用.结果表明,成功构建了 pCSMH-IFN-α8表达载体,实现了 poIFN-α8在大肠杆菌中的包涵体表达,且重组poIFN-α8蛋白具有良好的反应原性;0.05 ng/mL的重组poIFN-α8蛋白可显著抑制PRRSV在PAM中的复制,poIFN-α8的抗病毒效果显著优于猪干扰素α2(poIFN-α2)、猪干扰素α5(poIFN-α5),且重组poIFN-α8能有效激活ISG的表达.综上,表达的重组poIFN-α8蛋白能有效抑制PRRSV的复制,且能激活ISG的表达.

分类号： S855.1

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