稳定表达流感病毒PR8 HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄海碧

作者： 黄海碧;滕巧泱;王朝霞;戴晓光;张树梅;张旭;申之义;李泽君

作者机构：

关键词： 流感病毒;MDCK细胞系;HA基因;稳定表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2010 年 32 卷 07 期

页码： 517-520

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立稳定表达流感病毒(IV)HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的AgeⅠ和NotⅠ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8 HA与3个分别表达VSVG、gag/pol和NF-KB的重组质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。用含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行筛选、纯化得到稳定表达PR8株HA蛋白的细胞系。连续传10代后,进行PCR、RT-PCR、IFA和western blot鉴定,结果表明,获得了能够稳定表达IV PR8株HA蛋白的MDCK细胞系。该细胞系的建立有望为IV表达外源基因提供可靠的培养细胞系。

分类号： S852.65

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