文献类型： 中文期刊
第一作者： 王馨悦
作者： 王馨悦;韩秋雪;王振山;焦翠翠;毕津豪;许梦园;赵永坤;冯娜;王铁成;迟航;杨松涛;夏咸柱
作者机构：
关键词： 新型冠状病毒;纳米抗体;核糖体展示;抗体库;真核表达
期刊名称： 中国病原生物学杂志
ISSN： 1673-5234
年卷期： 2022 年 17 卷 003 期
页码： 249-253
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的 通过核糖体展示技术构建一个库容量大、多样性好的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)特异性纳米抗体文库;利用真核表达系统表达并制备具有筛选质量的SARS-CoV-2受体结合域(Receptor Binding Domain,RBD)蛋白,并作为钓饵蛋白应用于纳米抗体的筛选.方法 利用多种SARS-CoV-2特异性免疫原免疫羊驼,分离高免羊驼外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),提取总RNA并反转录获得cDNA,通过巢式PCR扩增纳米抗体基因,同时引入核糖体文库所需要的展示元件.利用重叠延伸PCR将VHH片段与间隔序列gene-Ⅲ连接,构建核糖体展示纳米抗体文库.利用Expi293F哺乳动物细胞表达SARS-CoV-2 RBD蛋白,通过StrepTrap HP亲和柱纯化重组蛋白,将其作为钓饵蛋白对所构建的纳米抗体文库进行四轮特异性筛选.结果 成功构建核糖体展示纳米抗体文库,该文库的多样性高、完整性好,有效库容为1.12×1013.利用哺乳动物细胞表达系统表达出SARS-CoV-2 RBD蛋白,纯度高达97.5%.通过对核糖体纳米抗体文库进行四轮特异性筛选,获得纳米抗体的基因序列,经鉴定序列多样性丰富.结论 成功构建SARS-CoV-2核糖体展示纳米抗体文库,制备出具有筛选质量的抗原并应用于抗体库的筛选,获得结构完整且序列多样性丰富的纳米抗体基因序列,为SARS-CoV-2纳米抗体的获得奠定了研究基础.
分类号： R373.1
- 相关文献
[1]猪流行性腹泻病毒纳米抗体酵母表达载体的构建及其表达分析. 王小奎,郭涛,李村院,李晓悦,胡瑞瑞,李雅心,张云峰,倪伟,胡圣伟. 2021
[2]特异性结合革兰氏阴性菌外膜蛋白C的单链抗体核糖体展示文库的构建. 王潇,王秀敏,管庆丰,滕达,姚军虎,王建华. 2015
[3]基因工程抗体研究进展. 李菁,林彤,宋帅,高闪电,邵军军,丛国政,独军政,常惠芸. 2009
[4]利用核糖体展示技术筛选口蹄疫病毒单链抗体基因. 代鹏,周广青,林密,冯霞,马军武,张晓霞. 2012
[5]斑点叉尾鲴天然单链(ScFv)噬菌体抗体库的构建及初步鉴定. 王辉,邹世平. 2011
[6]抗猪脂肪细胞膜抗体库的构建. 丁淑燕,苗向阳,朱瑞良,邵建军. 2005
[7]斑点叉尾天然单链(ScFv)噬菌体抗体库的构建及初步鉴定. 王辉,邹世平. 2011
[8]磷水平对广藿香药效成分的影响. 杨欣,卢丽兰,杨新全,张玉秀,王彩霞,符式龙,魏建和. 2020
[9]新生儿新型冠状病毒感染防控共识方案要点解析. 李芳,史源. 2020
[10]对383份鸟类样品检测未发现SARS-CoV-2阳性. 刘昊,李丽霞,王海军,司兴奎,孙文超,许强,白雪. 2020
[11]医学检验科应对新型冠状病毒肺炎的管理方案及医务防护措施. 孙艳婷,胡礼仪,杨磊,沈显群,侯梦一. 2020
[12]新型冠状病毒感染流行期间NICU的应急准备方案. 王建辉,包蕾,史源. 2020
[13]新型冠状病毒Beta变异株S1重组蛋白的制备及免疫效果评价. 范泽昌,冯生,梁明征,马杉姗,金宁一,哈卓,鲁会军. 2024
[14]表达新型冠状病毒奥密克戎BA.1变异株S1基因重组DNA疫苗的构建及免疫原性. 周可悦,冯生,范泽昌,梁明征,马杉姗,金宁一,李太元,哈卓,鲁会军. 2023
[15]新型冠状病毒PLpro的克隆、表达及其对抗病毒天然免疫反应的调节作用. 葛晨晨,尚超,张翠玲,芦静,李太元,李霄,金宁一. 2021
[16]新型冠状病毒肺炎疑似患儿照护者真实感受的质性研究. 冯美,郑显兰,沈巧,陶怡. 2020
[17]SARS-CoV-2细菌样颗粒的构建与鉴定. 魏世萌,毕津豪,李恩涛,焦翠翠,闫飞虎,王振山,陈祥,杨松涛,彭帅,赵永坤,夏咸柱. 2022
[18]基于仿真模型探讨病毒传播的流体力学实验. 李霞,李志强,史振东,焦晓燕,李华,王慧贤,冯占林. 2023
[19]马抗SARS-CoV-2特异性IgG与F(ab')2的制备研究. 许梦园,毕津豪,王馨悦,张颖,韩秋雪,莫若,闫飞虎,杨松涛,冯娜,王铁成,赵永坤,夏咸柱. 2022
[20]马抗SARS-CoV-2特异性IgG与F(ab’)2的制备研究. 许梦园,毕津豪,王馨悦,张颖,韩秋雪,莫若,闫飞虎,杨松涛,冯娜,王铁成,赵永坤,夏咸柱. 2022
作者其他论文 更多>>
-
甘薯新品种川薯234
作者：乔帅;谭文芳;王芳;宋伟;廖安忠;杨松涛
关键词：甘薯;川薯234;新品种
-
液质联用在三种灵芝鉴定中的应用
作者：孙一翡;梁建东;周帅;郭晓宇;崔宝凯;张劲松;戴玉成;冯娜
关键词：灵芝;分子生物学鉴定;三萜;液质联用;化学分类
-
SARS-CoV-2的多种Nsp对其聚合酶活性的影响
作者：程明新;朱鹏飞;闫芳;宋芳;王雪峰;王铁成;夏咸柱;高玉伟;闫芳
关键词：SARS-CoV-2;聚合酶活性报告系统;加帽;DMV
-
基于靶点TRPV4的抗SARS-CoV-2中药单体化合物筛选及其作用机制研究
作者：张诗筠;骆荣波;孙妍;李赫;樊凌君;钱丙硕;张钧魁;吴佳婧;申蓓蕾;王铁成;夏咸柱;高玉伟
关键词：瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4);新型冠状病毒(SARS-CoV-2);机器学习;甘草香豆素;分子动力学模拟
-
我国玉米产业发展现状、挑战与提升策略
作者：许中明;李芮莹;李银存;伏翔羽;白博元;倪赫;沈利国;王铁成
关键词：玉米;产业现状;挑战;提升路径;对策
-
宁南山区'红梅杏'与其他杏品种果实品质差异的分析
作者：李芳红;吴国平;田娇;冯娜;张婍;姜昌
关键词：红梅杏;果实品质;相关性分析;综合评价
-
麸皮添加量对代料栽培灵芝生长及活性成分的影响
作者：曾凡清;吕明亮;冯娜
关键词：代料栽培;灵芝;麸皮;生物量;多糖;三萜
