SARS-CoV-2核糖体展示纳米抗体文库的构建与筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王馨悦

作者： 王馨悦;韩秋雪;王振山;焦翠翠;毕津豪;许梦园;赵永坤;冯娜;王铁成;迟航;杨松涛;夏咸柱

作者机构：

关键词： 新型冠状病毒;纳米抗体;核糖体展示;抗体库;真核表达

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2022 年 17 卷 003 期

页码： 249-253

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 通过核糖体展示技术构建一个库容量大、多样性好的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)特异性纳米抗体文库;利用真核表达系统表达并制备具有筛选质量的SARS-CoV-2受体结合域(Receptor Binding Domain,RBD)蛋白,并作为钓饵蛋白应用于纳米抗体的筛选.方法 利用多种SARS-CoV-2特异性免疫原免疫羊驼,分离高免羊驼外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),提取总RNA并反转录获得cDNA,通过巢式PCR扩增纳米抗体基因,同时引入核糖体文库所需要的展示元件.利用重叠延伸PCR将VHH片段与间隔序列gene-Ⅲ连接,构建核糖体展示纳米抗体文库.利用Expi293F哺乳动物细胞表达SARS-CoV-2 RBD蛋白,通过StrepTrap HP亲和柱纯化重组蛋白,将其作为钓饵蛋白对所构建的纳米抗体文库进行四轮特异性筛选.结果 成功构建核糖体展示纳米抗体文库,该文库的多样性高、完整性好,有效库容为1.12×1013.利用哺乳动物细胞表达系统表达出SARS-CoV-2 RBD蛋白,纯度高达97.5%.通过对核糖体纳米抗体文库进行四轮特异性筛选,获得纳米抗体的基因序列,经鉴定序列多样性丰富.结论 成功构建SARS-CoV-2核糖体展示纳米抗体文库,制备出具有筛选质量的抗原并应用于抗体库的筛选,获得结构完整且序列多样性丰富的纳米抗体基因序列,为SARS-CoV-2纳米抗体的获得奠定了研究基础.

分类号： R373.1

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